Comportamento de isolados de Colletotrichum gloeosporioides inoculados em mudas micropropagadas de café / Behavior of isolated of Colletotrichum gloeosporioides inoculated micropropagated in seedlings of coffee

Muitos são os danos ocasionados por Colletotrichum gloeosporioides em plantas de cafeeiro, porém pouco são os conhecimentos sobre o estabelecimento do processo infectivo e sobre a evolução dos sintomas apresentados pelas plantas hospedeiras. Deste modo, o objetivo do estudo foi avaliar o comportamento de isolados de C. gloeosporioides obtidos de Cafeeiro em mudas produzidas a partir de sementes de plantas com sintomas de mancha manteigosa e sem sintomas de mancha manteigosa, estimar a agressividade do patógeno através da incidência e severidade da doença, comparando-os com um isolado oriundo de outra espécie vegetal. A partir da estimativa da incidência e severidade, observou-se que mudas oriundas de plantas com sintomas de mancha manteigosa são mais suscetíveis ao ataque de C. gloeosporioides. O isolado IS-II mostrou-se totalmente agressivo, apresentando um potencial crescente de doença em relação ao tempo.

Many are the damages caused by Colletotrichum gloeosporioides in coffee plants, but little is knowledge about the establishment of the infective process and the evolution of the symptoms presented by host plants. This study evaluated the behavior of isolates of C. gloeosporioides obtained from Coffee on seedlings grown from seeds with buttery spot symptoms and without symptoms of blister spot, estimate the aggressiveness of the pathogen through the incidence and severity of disease, comparing them with one isolate from other plant species. The estimation of the incidence and severity was observed that seedlings from plants with symptoms of blister spot are more susceptible to attack by C. gloeosporioides. The isolated IS-II shown to be fully aggressive, presenting a high potential for disease.

Potassium phosphite: a promising product in the management of diseases caused by Colletotrichum gloeosporioides in coffee plants / Fosfito de potássio: um produto promissor no manejo de doenças causadas por Colletotrichum gloeosporioides em cafeeiro

In recent years coffee productivity has been harmed by diseases caused by Colletotrichum gloeosporioides (Cg), for example, anthracnose, dieback and blister spot. Therefore, it has become necessary to develop alternative measures to control these diseases, since there are no fungicides registered in Brazil for their control. The aims of this work were: to evaluate the effect of potassium phosphite on the germination, fungal appressorium formation and mycelial growth of Cg and to verify this action in the reduction of disease severity of anthracnose in coffee leaves. The treatments used in an in vitro experiment were: potassium phosphite at doses of 1.25, 2.50, 5.0 and 10.0 mL.L-1, Acibenzolar-S-methyl at dose 0.1g.L-1 and Chlorothalonil fungicide at dose 2.0 g.L-1. In an in vivo experiment, beyond the treatments used in the in vitro experiment, we used a control sprayed with water without inoculation and another inoculated with Cg. Potassium phosphite at doses of 5.0 mL.L-1 and 10.0 mL.L-1 and the Chlorotalonil fungicide showed greater inhibition of conidial germination, greater inhibition of appressorium formation and further reduction of mycelial growth of the pathogen. In the in vivo experiment, Potassium phosphite at a dose of 10.0 mL.L-1 provided a greater reduction in disease severity, around 62.5%. This work demonstrated the potential of potassium phosphite in the management of diseases caused by fungi from the Colletotrichum complex in coffee plants.

Nos últimos anos a produtividade de café tem sido prejudicada por doenças causadas por Colletotrichum gloeosporioides (Cg), como por exemplo, antracnose, seca de ponteiros e mancha manteigosa. Portanto torna-se necessário desenvolver medidas alternativas de controle para essas doenças, visto que não existem fungicidas registrados no Brasil para seu controle. O presente trabalho teve como objetivos: avaliar o efeito do fosfito de potássio na germinação, formação de apressórios e no crescimento micelial de Cge verificar a ação do mesmo na redução da severidade da antracnose em folhas de cafeeiro. Os tratamentos utilizados no experimento in vitro foram: fosfito de potássio nas doses de 1,25; 2,50; 5,0 e 10,0 mL.L-1; acibenzolar-S-metil 0,1g.L-1; fungicida clorotalonil 2,0 g.L-1. Já in vivo, além dos tratamentos anteriores, foi utilizada uma testemunha pulverizada com água sem inoculação e outra inoculada com Cg.O fosfito de potássio nas doses de 5,0 mL.L-1 e 10,0 mL.L-1 e o fungicida clorotalonil proporcionaram maior inibição da germinação de conídios, maior inibição da formação de apressórios e maior redução do índice de velocidade de crescimento micelial do patógeno. No experimento in vivo, o fosfito de potássio na dose de 10,0mL.L-1 proporcionou maior redução na severidade da antracnose, em torno de 62,5 %.Este trabalho demonstrou o potencial do fosfito de potássio no manejo de doenças causadas por fungos do complexo Colletotrichum em cafeeiro.

Genetic transformation with the gfp gene of Colletotrichum gloeosporioides isolates from coffee with blister spot

Blister spot (Colletotrichum gloeosporioides) is now widespread in most coffee producing states of Brazil, becoming a limiting factor for production. The lack of data relating to the reproduction of typical symptoms (light green, oily patches) leaves a gap within the pathosystem, forcing the search for new methodologies for monitoring the disease. Monitoring of genetically modified organisms has proven to be an effective tool in understanding the host x pathogen interactions. Thus, the present study was carried out to evaluate the effectiveness of two systems of genetic transformation in obtaining mutants using the gfp reporter gene. Using the two transformation systems (PEG and electroporation) revealed the efficiency of both, confirmed by fluorescence microscopy and resistance to the antibiotic hygromycin-B, when incorporated into the culture medium. The fungus maintained its cultural and morphological characteristics when compared to wild strains. When inoculated on coffee seedlings, it was found that the pathogenicity of the processed isolates had not changed.

Exsudatos radiculares de plantas de cobertura no desenvolvimento de Sclerotinia sclerotiorum / Exudates of cover crops in the development of Sclerotinia sclerotiorum

O objetivo do trabalho foi avaliar a influência dos exsudatos radiculares das plantas de cobertura: crotalária (Crotalaria juncea L.), braquiária (Urochloa ruziziensis R. Germ. & Evrard), capim-mombaça (Panicum maximum cv. Mombaça Jacq.), milheto (Pennisetum glaucum (L.) R. Brown), feijão-guandu-anão (Cajanus cajan (L.) Millsp.) e estilosantes (Stylosantes capitata Vog.; Stylosanthes macrocephala Ferr. Et Costa) no desenvolvimento de Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary. Para a liberação dos exsudatos, as raízes de plantas cultivadas durante 24 dias foram submetidas à centrifugação. Obtido os exsudatos, estes foram esterilizados por processos de filtragem com a utilização de membrana com poro de 0,22µm armazenados em tubos e acondicionados a -20ºC. O efeito dos exsudatos foi estudado em relação ao crescimento micelial, germinação micelial, desenvolvimento carpogênico do escleródio e germinação dos ascósporos de S. sclerotiorum. As concentrações utilizadas foram 1%, 10% e 25%, obtidas por meio da diluição em água destilada esterilizada. Os resultados mostraram que o índice de velocidade de crescimento micelial foi menor quando utilizado o exsudato de U. ruziziensis nas concentrações de 1% e 10%. Os exsudatos não influenciaram a germinação micelial dos escleródios. Quanto aos ascósporos, os exsudatos radiculares de Cajanus cajan e Styloshantes sp. inibiram a germinação quando não foi adicionado sulfato de streptomicina.

The objective was to explore the influence of root exudates of some cover plants known as Crotalaria juncea, Urochloa ruziziensis, Panicum maximum cv. mombaça, Pennisetum glaucum, Cajanus cajan e Stylosantes sp. For the release of exudates roots plants were grown for 24 days, were subjected to centrifugation. Retrieved these exudates were sterilized by filtering processes using a membrane with pore size of 0.22 micrometers. The filtrates were stored in tubes and stored at -20°C. The effect of the exudates were studied in relation to mycelial growth, mycelial and carpogenic germination of sclerotia and germination of ascospores of S. sclerotiorum. The concentrations used were 1%, 10% and 25% obtained by dilution in sterile water. The results showed mycelial growth rate was lower when using the exudate of U. ruziziensis concentrations of 1% and 10%. The exudates did not affect mycelial germination of sclerotia. Concerning the ascospores of Cajanus cajan and Stylosanthes spp. root exudates inhibited germination when it was added streptomycin.

Produção e regeneração de protoplastos de Colletotrichum gloeosporioides em diferentes condições de cultivo / Production and regeneration of protoplasts from Colletotrichum gloeosporioides in different conditions

A obtenção de protoplastos de fungos, utilizando-se enzimas degradadoras de parede celular, tem sido o método mais utilizado em processos de transformação genética. Foram testados dois tipos de estruturas fúngicas (micélio e conídios), diferentes concentrações enzimáticas (5, 10, 20 mg), estabilizadores osmóticos (NaCl 0,7 mol.L-1 pH 5,7; (NH4)2SO4 1,2 mol.L-1 pH 5,8; KCl 0,7 mol.L-1 pH 5,8; MgSO4 0,7 mol.L-1 pH 5,5; Sacarose 0,5 mol.L-1 pH 5,7; SorbitoL 0,6 mol.L-1 pH 5,7) e seis tempos de exposição dos protoplastos ao sistema lítico, para estabelecer condições otimizadas de obtenção e regeneração de protoplastos de Colletotrichum gloeosporioides, agente relacionado a mancha manteigosa em cafeeiros. Protoplastos de C. gloeosporiodes foram obtidos em maior quantidade quando o micélio foi exposto durante 4 horas, com 10 mg.mL-1 de Lysing Enzime em KCl 0,7 mol.L-1 que se apresentou como melhor estabilizador osmótico, com frequência de regeneração de 11,64%.

The isolation and regeneration of protoplasts from fungal cells, using several cell wall degrading enzymes, has been the most common method to prepare competent cells for genetic studies of filamentous fungi. In this work two types of fungal structures, different enzyme concentrations (5, 10, 20 mg), osmotic stabilizers (NaCl 0,7 mol.L-1 pH 5,7; (NH4)2SO4 1,2 mol.L-1 pH 5,8; KCl 0,7 mol.L-1 pH 5,8; MgSO4 0,7 mol.L-1 pH 5,5; Sacarose 0,5 mol.L-1 pH 5,7; Sorbitol 0,6 mol.L-1 pH 5,7), and six exposure times to establish optimum conditions of isolation and regeneration of protoplasts of Colletotrichum gloeosporioides, agent of blister spot on coffee, were tested. Protoplast of C. gloeosporioides were obtained in greater quantities when the mycelium was exposed for 5 hours with 15mg.mL-1 of Lysing Enzyme in 0.7 mol.L -1 of KCl as osmotic stabilizer, presenting a regeneration rate of 11.64%.

Efeito da temperatura no crescimento micelial, produção e germinação de conídios de Colletotrichum spp. isolados de mangueira com sintomas de antracnose / Effect of temperature on mycelial growth, production and germination Colletotrichum spp. isolated from mango with symptoms of anthracnose

Muitos são os problemas fitossanitários encontrados na cultura da mangueira (Mangifera indica L), dentre eles destaca-se o fungo Colletotrichum gloeosporioides causador da antracnose, doença que atinge todos os órgãos da planta. O presente trabalho teve como objetivo analisar a influência da temperatura no desenvolvimento das colônias de três isolados de Colletotrichum spp. obtidos de diferentes órgãos da mangueira. Os três isolados apresentaram melhor crescimento micelial na faixa de temperatura de 20 a 25 °C. A faixa de temperatura de 25 a 30 °C demonstrou se mais eficiente em relação à germinação de conídios e esporulação para os isolados de Colletotrichum spp.

Many disease problems are found in the culture of mango (Mangifera indica L), among them stands out Colletotrichum gloeosporioides causing anthracnose disease, which affects all plant organs. This study aimed to analyze the influence of temperature on the development of colonies of three isolates of Colletotrichum spp. obtained from different organs of the hose. The three isolates showed better mycelial growth in the temperature range 20-25 ° C. The track temperature 25-30 ° C showed more efficient in relation to the germination of conidia and sporulation for Colletotrichum spp.

Transmissibilidade e efeito do tratamento de sementes de cafeeiros com mancha manteigosa (C. gloeosporioides) / Transmission and effect of fungicide treatment on seeds of coffee trees affected by blister spot (C. gloeosporioides)

Neste trabalho, os objetivos foram avaliar a transmissibilidade de C. gloeosporioides mancha manteigosa (MM) em sementes e estudar o efeito do tratamento por fungicidas no controle do referido patógeno. Colheram-se frutos cerejas em plantas doentes e sadias, procedeu-se o despolpamento manual secando as sementes à sombra, retirou-se o endocarpo e, em seguida, realizaram-se os devidos tratamentos (fungicida) semeando-as em areia esterilizada. Avaliaram-se os sintomas de necrose e morte das plântulas e a incidência de C. gloeosporioides, por meio do teste de incubação em substrato de papel (blotter test), em sementes de cafeeiro tratadas e não tratadas com mistura comercial de benzimidazol+dimetilditiocarbamato (dose i.a. de 45 g+105 g/100 kg sementes). Com o desenvolvimento das plântulas, observaram-se em sementes de plantas com MM , altos índices de morte de plântulas, tendo apenas 5,2 por cento de sobrevivência, porém, com a abertura dos primeiros folíolos observaram-se, nestas plântulas, sintomas típicos da doença, com posterior morte das mesmas, enquanto que, a partir de sementes sadias, as plântulas apresentam-se vigorosas e em pleno crescimento. Já, com o uso do tratamento fungicida, observou-se efeito significativo, principalmente em sementes de plantas doentes (MM), nas quais verificou-se uma menor área abaixo da curva de progresso da doença e, consequentemente, menor incidência e severidade da doença. Pelo bloter test, em sementes tratadas, não houve crescimento de nenhum agente fúngico tanto para sementes de plantas com MM como para sementes de plantas sadias. Em sementes não tratadas, observou-se incidência de C. gloeosporioides em 29,8 por cento nas sementes de plantas com MM e 1,2 por cento de incidência em sementes de plantas sadias. Com base nestes resultados, fica evidenciado que neste patossistema, mancha manteigosa - cafeeiro, a principal via de transmissão de C. gloeosporioides é a semente.

The objectives in this study were: (i) the assessment of the transmission of blister spot(C. gloeosporioides) from seed to plant, and (ii) an observation study on the effect of seed treatment with fungicides used in the control of that disease. Natural transmission of the fungus was studied in seeds collected from both healthy and diseased 'Catucaí' coffee trees. The endocarp of the seeds was removed, and the seeds were sowed in sterilized sand substrate. The symptoms and the death process of hypocotyls were evaluated. Additionally, the incidence of blister spot (C. gloeosporioides) was assessed through blotter test in both fungicide treated and untreated seeds. A large number of hypocotyl deaths in seeds obtained from blister spot trees were observed, whereas seeds collected from healthy trees produced healthy seedlings. A total of 5.2 percent of the seedlings from blister spot trees were apparently healthy. But after the completion of the development of the first pair of leaves, blister spot symptoms were observed. When treated with fungicides (benzimidazol + dimethyldithiocarbamate), seeds from blister spot and healthy trees were free of fungi. Seeds collected from blister spot trees presented an incidence of 29.8 percent C. gloeosporioides , whereas seeds collected from healthy trees had an incidence of 1.2 percent. Therefore, based on the results of this study, it was clear that seeds were the principle means of transmission of blister spot in coffee.

Efeito de fungicidas e influência de fatores climáticos sobre a mancha manteigosa no cafeeiro / Effect of fungicides and influence of climatic factors on the blister spot of coffee trees

Neste trabalho, objetivou-se avaliar a eficiência de alguns fungicidas no controle da mancha manteigosa (Colletotrichum gloeosporioides) do cafeeiro (Coffea arabica L.) em campo, e verificar os efeitos climáticos no progresso da doença. Foram conduzidos ensaios sobre cafeeiros da cultivar Catucaí Vermelho, com aproximadamente 8 anos de idade. Os fungicidas testados foram: tetraconazol, triadimenol, chlorotalonil e mancozeb, nas dosagens de 1,0L/ha, 12Kg/ha, 3Kg/ha e 2Kg/ha, respectivamente. Coletaram-se dados climáticos diariamente, no período de outubro de 2004 a maio de 2006. Os fungicidas chlorotalonil e triadimenol foram os que proporcionaram os melhores resultados de eficiência de controle do progresso de morte de ramos e frutos, destacando a produção de frutos cereja. Entre os meses de outubro a janeiro, verificou-se elevado progresso de mortes de ramos influenciado pelas altas precipitações pluviais. Os fungicidas tetraconazol e o mancozeb mostraram-se ineficientes. Plantas com mancha manteigosa, mesmo quando pulverizadas com fungicidas, tiveram significativa queda de frutos, enquanto plantas sadias apresentaram produções 95% superiores àquelas.

The aim of this work was to assess the effect of selected fungicides on the control of coffee blister spot in the field and to verify the climatic effects on the progress of the disease. Trials were carried out with coffee plants of cultivar Catucaí Vermelho, approximately 8 years old. The fungicides tested were tetraconazol (1L/ha), triadimenol (12Kg/ha), chlorothalonil (3Kg/ha), and mancozeb (2Kg/ha). Climatic data were collected daily from October 2004 to May 2006. The fungicides chlorotalonil and triadimenol provided the best efficiency results on the control of the progress of die-back and the number of fruits, with an increase in the cherry production. The increase of die-back during the period from October to January was possibly induced by the rainfall. Tetraconazol and mancozeb were not efficient. Coffee trees affected by blister spot, even if treated with fungicides, had significant decrease in the fruit production and the untreated healthy trees had their yield 95% higher than of those treated.

Análise da dinâmica, estrutura de focos e arranjo espacial da mancha manteigosa em campo / Analysis of the dynamics, foci structure and spatial arrangement of the blister spot in the field

Objetivou-se estudar a dispersão espacial da mancha manteigosa em cafeeiro, por meio de arranjos espaciais e da análise da dinâmica e estruturas de focos da doença durante três anos consecutivos. Nesse período, não houve progresso da doença no campo. Sob plantas doentes, surgiam mudas com sintomas da doença, um indício da transmissibilidade via semente. Constatou-se um total de 10 focos, com média de 2,5 plantas/focos e com tendência desses focos (maior número de plantas sintomáticas) na direção das linhas de plantios, tendo disposição de forma elíptica. Observou-se número elevado de focos unitários, correspondendo a 52 por cento das plantas doentes. Pelas análises de seqüências ordinárias runs e doublet verificou-se padrão espacial aleatório. Tal fato indica que a mancha manteigosa ocorre a partir de plantas isoladas (focos unitários) e que a principal via de transmissão é a semente (semente/planta/semente).

The aim of this study was to analyze the spatial dispersion pattern of the blister spot on coffee trees, through spatial arrangements and the analysis of the dynamics and foci structure of the disease during three consecutive years. No disease progress was observed in this area during the period of study. Seedlings showing disease symptoms were found under the canopy of diseased trees, strongly indicating that the disease may be transmitted through the seeds. Ten foci with 2.5 trees per focus were observed in the studied area. The foci were distributed following the plant rows with elliptical shape. Unitary foci predominated in the area in 52 percent of the diseased trees. Analyses of runs and doublets showed a random spatial pattern of the disease. These results evidenced that the blister spot occurs from isolated plants (unitary foci) and this characteristic may possibly be explained if the seeds are the main disease transmission agent (seed-plant-seed).

Sensibilidade de Colletotrichum gloeosporioides (mancha manteigosa do cafeeiro) a diferentes concentrações de fungicidas / Sensibility of Colletotrichum gloeosporioides (coffee blister spot) to different fungicide concentrations

Com o objetivo de avaliar a eficiência de alguns fungicidas sobre Colletotrichum gloeosporioides, agente etiológico da mancha manteigosa do cafeeiro (Coffea arabica L.), testes in vitro foram conduzidos no Laboratório de Diagnose e Controle/UFLA. Utilizou-se o método de incorporação de fungicidas ao meio de cultura MEA 2 por cento para a avaliação da inibição do crescimento micelial e em lâmina escavada contendo água com fungicida para a germinação de conídios. Os fungicidas, tetraconazol, triadimenol, chlorotalonil e mancozeb foram testados quanto à inibição do crescimento do micelial (nas concentrações de 1, 5, 10, 25, 50, 100, 500 e 1.000 mg L-1) e quanto à inibição da germinação de conídios (nas concentrações de 1, 5, 10, 25, 50 e 100 mg L-1). Os fungicidas tetraconazol e triadimenol apresentaram alta eficiência na inibição do crescimento micelial. Os fungicidas chlorotalonil e mancozeb mostraram baixa eficiência e ineficiência, respectivamente. Quanto à germinação dos conídios, os fungicidas que demonstraram maior eficiência em baixas concentrações foram o chlorotalonil e o tetraconazol.

With the aim of assessing the effect of selected fungicides on Colletotrichum gloeosporioides, the cause of coffee blister spot, in vitro tests were carried out in the Laboratory of Diagnosis and Control/UFLA, Federal University of Lavras, Brazil. In the in vitro experiments the fungicides were incorporated into malt extract medium (MEA 2 percent) to evaluate the effect on the fungus growth rate, and concavity slides containing water plus fungicide to assess the conidia germination. The fungicides tetraconazol, triadimenol, chlorothalonil and mancozeb were tested on the mycelial growth inhibition (in the concentrations of 1, 5, 10, 25, 50, 100, 500 and 1.000 mg L-1) and on the inhibition conidia germination (in the concentrations of 1, 5, 10, 25, 50 e 100 mg L-1). The fungicides tetraconazol and triadimenol showed high efficiency on the mycelial growth inhibition. Chlorotalonil and mancozeb showed low efficiency and inefficiency, respectively. As to the germination of conidia, chlorothalonil and tetraconazol demonstrated to be more efficient in low concentrations.

Constatação de Xylella fastidiosa em pecíolos e hipocotilos de cafeeiro com sintomas de mancha manteigosa / Report of Xylella fastidiosa in petioles and hypocotyls of coffee plants with symptoms of Buttery spot

A mancha manteigosa tem afetado um grande número de plantas de cafeeiro em condições de campo. Sua causa tem sido atribuída a Colletotrichum gloeosporioides, entretanto a sintomatologia da doença na folha não tem sido reproduzida. Neste estudo, relata-se pela primeira vez a associação de Xylella fastidiosa, agente da atrofia dos ramos de cafeeiro, com pecíolo de folhas e hipocótilos obtidos a partir de sementes de plantas com sintomas da mancha manteigosa, através de estudos ultra-estruturais em Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV), bem como por PCR (Polymerase Chain Reaction). Para o estudo foram realizados três ensaios. No primeiro, coletaram-se folhas com sintomas de mancha manteigosa e assintomáticas em duas localidades as quais foram preparadas para MEV. No segundo, pecíolos de 40 plantas sintomáticas e 40 assintomáticas foram coletados no campo experimental de café da UFLA. Os Pecíolos das folhas foram cortados e macerados para extração do DNA e analisados por PCR. Quatro pecíolos de cada uma destas amostras (plantas com e sem sintomas) também foram preparados para MEV. Em um terceiro ensaio, sementes obtidas de plantas com sintomas de mancha manteigosa, foram semeadas em bandejas de isopor contendo substrato Plantmax®. As bandejas permaneceram em câmara de crescimento e aos 30, 60 e 90 dias, após a semeadura, foram coletados hipocótilos para preparação e observação em MEV. Inicialmente uma bactéria semelhante à Xylella foi encontrada nos vasos do xilema de plantas sintomáticas das duas localidades estudadas. Pela análise por PCR constatou-se X. fastidiosa em 34 por cento das plantas com sintoma da doença e 9,3 por cento nas sem o sintoma da mancha manteigosa. Pecíolos de plantas Xylella positivas por PCR apresentaram obstrução dos vasos do xilema pelas bactérias. Das quatro plantas negativas por PCR, apenas uma teve o pecíolo com vasos obstruídos pela bactéria quando analisados em MEV. Em hipocótilos analisados em MEV verificaram-se...

Buttery spot has greatly affected coffee plants in field conditions. Its cause has been attributed to Colletotrichum gloeosporioides. However, its symptoms in leaves have not been reproduced. In this study we reported for the first time the presence of X. fastidiosa, causal agent of the coffee atrophy in petiole and hypocotyls from coffee plants with buttery spot through PCR and ultrastructural studies by scanning electron microscopy (SEM). In this study three trials were developed. In the first we collected leaves from plant with and without buttery spot symptoms in two places which were prepared for SEM. In the second petioles of 40 symptomatic and 40 asymptomatic leaves were collected in a coffee experimental field of Federal University of Lavras. Petiole from these leaves were cut and macerated for DNA extraction and analyzed by PCR. Four petioles of each sample (plants with and without symptoms) were prepared for SEM. In a third trial, seeds from plants with battery spot were sowed in foam trays with Plantimax® substrate. The trays stayed in a growth chamber and after 30, 60 and 90 days of the germination hypocotyls were collected for preparation and observation in SEM. Initially a bacterium similar to X. fastidiosa was found in vessels of symptomatic plants studied. Through the analysis by PCR we verified X. fastidiosa in 34 percent of plants with the disease symptoms and 9,3 percent in those without symptom of buttery spot. Petioles of positives Xylella plants by PCR presented obstruction of vessels of xylem by bacteria. Out of four PCR-negatives plants, one had petioles with vessels clogged by bacteria when analyzed by SEM. In analyzed hypocotyls with SEM were observed bacterial cells like X. fastidiosa in xylem vessels at 60 and 90 days. This is the first report of the colonization of X. fastidiosa in coffee plant petiole and hypocotyls of seeds of plants expressed buttery spot symptoms.